Kaks meetodit peptiidide lõikamiseks tahkefaasilistest vaikudest
Meetod polüpeptiidide lõhustamiseks tahke{0}}faasi vaikudest
tahke faas Fmoc Pärast peptiidide keemilist sünteesimist on palju lõhustamismeetodeid. Nüüd tutvustame kahte põhitüüpi, mida kõik tavaliselt kasutavad.
1. Tugeva happe meetod (tavaliselt kasutatav TFA)
Asetage kuiv vaik loksutuskolbi ja lisage sobiv kogus püüdurit (Scavengers) Lõhustusreaktiiv trifluoroäädikhapet (TFA), 10–25 ml/g vaiku, katke kinni ja loksutage vahelduvalt toatemperatuuril. Filtreerige vaik uue TFA-ga Peske vaiku 2-3 korda, ühendage filtraat ja lisage tilkhaaval 8-10-kordse mahuga jääeetrit. Mõnikord saab osa sellest TFA-st välja aurutada. Saadi toorpeptiidi sade. Sadestamise tõhususe parandamiseks võib dietüüleetrit jahutada jääga. Lõpuks koguge kokku sadestunud toorpeptiid.
Kasutatav vaik:kuningas vaik või Rink Amide Resin
2. Nõrga happe meetod (lahjendatud TFA või äädikhape)
1% TFA:
1 g Polüpeptiid-rippuv vaik lisati 1% TFA-d sisaldavale lahusele. Diklorometaanilahuse klaasist loksutamiskolb suleti ja loksutati 2 minutit. Kasutage lämmastikku, et valada filtraat teise uude metanooliga loksutuskolbi, mis sisaldab 10% püridiini. Korrake ülaltoodud toimingut 10 korda. Kasutage 30 ml DCM-i, 30 ml MeOH-d. Peske ülejäänud kaitstud peptiidid vaigul kolm korda järjest. TLC või HPLC abil Kontrollige puhastusjääke. Kombineerige kogu filtraat ja aurustage lahusti alandatud rõhul, et jätta 5% mahust. lisage 40 ml vett ja jää{16}}jahutas segu, et soodustada sademete teket. Pärast filtreerimist peske toodet kolm korda puhta veega ja asetage kasutamiseks vaakumkuivatuskasti. KOH või P2O5 Laske kuivada.
lahjendatud äädikhape:
kasutage AcOH/TFE/DCM (2:2:6) Töötlege vaigul rippuvaid peptiide lõikelahusega 2 tundi, filtreerige vaik ja peske vaiku kolm korda lõikelahusega. Lisage segatud filtraadile 15-kordne maht n-heksaani ja äädikhappe liia eemaldamiseks pöördaurustage. Peptiidide taastamise meetodeid kirjeldatakse üksikasjalikult allpool.
Kasutatav vaik:2- CTC vaik